VISITA A TORRECARDENAS ( aparatos que se emplean para conservación y realización de las pruebas diagnósticas

CONTADOR HEMATOLÓGICO

Aquí os dejo un vídeo de mis compañeros de clase de TSLDC explicando muy bien las partes que  componen un contador hematológico y su consiguiente funcionamiento.

DETERMINACIÓN EN TARJETA

FUNDAMENTO

Determinar los anticuerpos presentes.





MATERIALES

- Tarjeta 
- Suspensión de hematíes.
- Reactivo Liss.
- Hematíes control.





PROCEDIMIENTO

- Echar 50  uL de la solución resultante al mezclar  1 mL de solución de Liss y 10 uL de hematíes.

- En el último tubo añadir 50 uL de hematíes control.
- Centrifugamos durante 10 min en la centrifuga de tarjetas.  
 

RESULTADO FINAL

PRUEBAS CRUZADAS

FUNDAMENTO:

Trata de determinar si puede haber una incompatibilidad entre el donante y el receptor se hace en caso de transfusión, y en ella se enfrenta el suero del receptor con los hematíes del donante.

MATERIAL:

- Suero de Coombs
- Albúmina
- Suero problema
- Hematies conocidos.
- Pipeta manual.
- Gradilla.
- Tubos de ensayo.
- Suero fisiológico salino.








- Echar dos gotas de suero del paciente.
- Echar dos gotas de suspensión de hematíes e incubar 5 min.
- Centrifugar 1 min a 2000 r.p.m.
- Tras resuspender y comprobar que no hay aglutinación echamos  2 gotas de albúmina.
- Incubar 30 min a 37ºC.
- Centrifugar 1 min a 2500 r.p.m y resuspender para comprobar si hay aglutinación.




















Realizamos 3 lavados utilizando 2 mL de solución salina para retirar todo lo inecesario.

- Tras eliminar el sobrenadante dejar el botón hemático.
- A este echarle dos gotas de suero de coombs y centrifugar 2 min/ 25000 r.p.m.
- Por último resuspender y comprobar si se ha producido aglutinación.
En nuestra prueba comprobamos que en el resultado final no hay aglutinación por lo que el paciente y el donante son compatibles.

ANTICUERPOS IRREGULARES

FUNDAMENTO

Se basa en la detección de anticuerpos irregulares o incomppletos, que aparecen en el suero o no independientemente de que exista el antígeno correspondiente.
Para determinarlos es necesario el cambio del medio ( medio albuminoso, salino, enzimático).

MATERIALES

PROCEDIMIENTO

- Poner dos gotas de suero problema.
- Al primer tubo ponerle una gota de hematíes control I.
- Añadir al tubo dos una gota de hematíes control II.
- Añadir al tubo tres una gota de hematíes control III.
- Centrifugar los tubos 1min a 3000 r.p.m.
- Resuspender.
- Tras este paso añadir una gota de albúmin a los tubos que no hayan aglutinado.
- Incubar en el baño maría a 37ºC durante 30 min.
- Añadir a cada tubo 2mL de solución salina para lavado (x3).

Test de Coombs indirecto.

Fundamento:

En esta prueba se trata de investigar la presencia de Ac incompletos libres en el suero del paciente. Los hematíes que han de servir de reactivo para la prueba han de ser de estructura antigénica conocida (grupo O Rh+). La prueba se realiza en dos fases:

 • En una primera fase, se incuba el suero del paciente con unos hematíes conocidos (tipo) O,Rh+, que no tienen adheridos a su superficie ningún tipo de Ig ni ningún componente del complemento. La finalidad de esta incubación consiste en sensibilizar in vitro los hematíes tipo, por parte de los Ac incompletos que puedan estar contenidos en el suero problema. 

• En una segunda fase, se añade un suero antiglobulina humana, que producirá una aglutinación de los eritrocitos, en el caso de que éstos se hayan sensibilizado en la fase anterior.

 Se realiza en tubo y se utiliza para:

 - En pruebas cruzadas, para detectar incompatibilidades 

 - Para la detección e identificación de anticuerpos irregulares.

 - En el laboratorio se utiliza para detectar anticuerpos anti-D, IgG incompletos, libres, en el plasma de una embarazada Rh(-) con posible riesgo de sensibilización.

Muestra problema.                             Materiales

 Suero o plasma de la paciente de la que se pretende averiguar si está o no sensibilizada con anticuerpos anti-D.

Técnica: 

a) Preparación de los hematíes de especificidad conocida. En este caso, hematíes con el antígeno D y del grupo O para evitar aglutinación por este sistema. Si no se dispone de estos hematíes, se utiliza sangre del sistema ABO compatible con la muestra problema. 

-Lavar los hematíes con solución salina isotónica, 2-3 veces. 

Centrifugar 4-5 minutos a 1.000 g y decantar el sobrenadante (en el último lavado, eliminarlo al máximo). 

-Preparar una suspensión de hematíes del 5% (0,1 ml de concentrado de hematíes lavados + 1,9 ml de solución salina isotónica).

 b) Preparar en tres tubos centrífuga rotulados, tres controles como se indica:

 -Control negativo: 2 gotas anti-D + 2 gotas de suspensión de hematíes Rh negativos al 5 por 100. 

-Control positivo: 2 gotas anti-D (diluido a 1/10 con solución salina isotónica) + 2 gotas de suspensión de hematíes Rh positivos al 5 por 100.

 -Control de solución salina: prepararlo en principio como un control negativo.

 c) En el tubo problema echar 2 gotas del suero problema + 2 gotas de suspensión de hematíes O + preparados en el punto a.

d) Mezclar e incubar a 37º C de 30-60 minutos. En este tiempo, si en el suero hay anticuerpos anti-D incompletos, se unen al hematíe D pero no consiguen la aglutinación. 

e) Lavar de nuevo con solución salina fisiológica 3 veces. La razón del lavado está en eliminar del tubo cualquier resto de globulinas procedentes del suero problema o del plasma en la suspensión de hematíes. Sólo deben quedar en el tubo: los hematíes, si la prueba es negativa, o los hematíes recubiertos con los anticuerpos que buscamos.

 f) Añadir 2 gotas del suero antiglobulina humana al tubo problema (suero poliespecífico contra cualquier tipo de globulinas humanas). Por esto son tan importantes los lavados, ya que cualquier resto de globulinas puede unirse al suero antiglobulínico, gastándose en estas uniones y no en el anticuerpo unido al hematíe. Tendríamos así falsos negativos. Se puede usar un suero algo más específico anti-lgG humano, pero el lavado sigue siendo imprescindible para eliminar todas las IgG libres. 

g) Añadir también dos gotas de antiglobulina humana a los tubos controles + y - y añadir dos gotas de solución salina isotónica al tubo control de la solución salina. Este tubo no debe aglutinar. h) Mezclar suavemente. Esperar 1-2 minutos a temperatura ambiente.

 i) Centrifugar los cuatro tubos 1 minuto a 150 g. j) Levantar el sedimento con pequeños golpes. Si la suspensión es homogénea en el tubo problema, la prueba es negativa. Si hay aglutinación de los hematíes, la prueba es positiva. En este caso se hacen diluciones del suero: 1/2, 1/4, 1/8, etc, y se repite la prueba. El título es el denominador de la última dilución que aglutina. El control + debe aglutinar y no deben aglutinar los controles - y de la solución salina.

Test de Coombs directo

FUNDAMENTO

Se trata de detectar Ac incompletos y/o complemento fijados in vivo a los hematíes problema.
Esto se realiza añadiéndo, a estos eritrocitos sensibilizados, un suero antiglobulina humana que contiene Acs completos capaces de producir su aglutinación.
En esta prueba, los acs incompletos funcionan como Ags y los Ac completos ejercen el papelde Acs, siendo los glóbulos rojos las partículas que son aglutinadas. Indicada para diagnosticar anemias hemolíticas inducidas por fármacos, reacciones postransfusionales.

MATERIALES

- Solución salina fisiológica 0.9%.
- Suero de Coombs.
- Suspensión de hematíes.
- Gradilla.
- Pipetas pasteur.
- Tubos de ensayo.








PROCEDIMIENTO

- Añadir dos gotas de suspensión de hematíes a cada tubo.
- En un tubo añadir dos gotas de solución salina.
- En el otro tubo dos gotas de suero de Coombs.
- Centrifugar a 3000 rpm/1min.
- Resuspender y observar la aglutinación.
- Echar control de Coombs en los dos tubos.
- Centrifugar.
- Y por último observar si el resultado es el mismo, el paso anterior sirve para comprobar que el resultado es correcto.

Prueba sérica: determinación en porta

FUNDAMENTO

Determinar la existencia y tipo de Ac que hay en el suero.



MATERIALES

- Suero

- Placa de porcelana con pocillos

- Asas de siembra

PROCEDIMIENTO

1. Echar una gota de suero en cada pocillo.

2. Echar una gota de reactivo en cada pocillo correspondiente.

3.Mezclar y esperar a que se produzca la aglutinación.

4. Se observa en la lupa.

Prueba sérica: determinación en tubo

FUNDAMENTO

Esta prueba consiste en comprobar los anticuerpos que se encuentran en el suero de este modo se determina el grupo sanguíneo del paciente.

MATERIAL

- Tubos de ensayo
- Suero
- Células A y células B
- Centrífuga

PROCEDIMIENTO


1. Rotular 2 tubos de ensayo con las letras A y B.
2. Colocar en cada tubo dos gotas del suero a estudiar.
3. Añadir 1 gota de células A1 al tubo A, y una de células B al tubo B.
4. Mezclar agitando suavemente. Para aumentar la aglutinación, dejar incubar los tubos unos 5 minutos a temperatura ambiente.
5. Centrifugar. Con iluminación adecuada observar el sobrenadante para detectar hemólisis y agitando suavemente leer la presencia o ausencia de aglutinación
6. Anotar inmediatamente los resultados.

Determinación hemática del grupo sanguíneo en tubo

FUNDAMENTO

Determinar la existencia y tipo de antígeno que contiene la membrana del hematíe.

MATERIALES

- Pipeta autómatica.
- NaCl (0.9%).
- Tubos de ensayo
- Pipeta manual
- Sangre anticoagulada.
- Anti-A, anti-b y anti-a+b









PROCEDIMIENTO

1. Lavar suspensión de hematíes tres veces en solución salina y suspender las células al 5%.
2. Seleccionar dos tubos de ensayo limpios y rotularlos A y B.
3. Colocar una gota de Anti- A, en el tubo A, y una gota de anti-B en B.
4. Añadir una gota de la suspensión de hematíes problema y agitar.
5. Centrifugar los tubos a 2000 r.p.m durante 2 min.
6. Anotar la presencia o ausencia de aglutinación.