Determinación cuantitativa del fibrinógeno

FUNDAMENTO:

El fibrinógeno en presencia del coágulo de trombina, se transforma en fibrina.
El tiempo de formación del coágulo es inversamente proporcional a la concentración de fibrinógeno presente en la muestra de plasma.

En presencia de altas concentraciones de trombina, el tiempo necesario para la formación del coágulo en el plasma diluido es inversamente proporcional a la concentración de fibrinógeno.

SIGNIFICADO CLÍNICO:

La concentración de fibrinógeno se incrementa en inflamaciones agudas y embarazo; por el contrario se observan valores bajos en terapias trombolíticas, enfermedades hepáticas, disfibrinogenia congénita, DIC y pancreatitis.

REACTIVOS:

R1: Trombina bovina.
R2: Tampón Lmidazol.
R3: Solución caolín.
Opcional: Coagulation CAL.

PREPARACIÓN:

R1 reconstituir en 2 mL de agua destilada. Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido.

MATERIAL ADICIONAL:

- Coagulómetro.

MUESTRAS:

- Plasma obtenido por punción venosa diluido 1/10 en solución de citrato trisódico 3.8%.
- Mezclar la sangre inmediatamente con el anticoagulante. Centrifugar  3000 r.p.m 10 min y transferir el plasma.

PROCEDIMIENTOS:
1. Preparar dilución 1/10 de la muestra y los controles en tampón lmidazol; 50ul muestra+ 450ul tampón lmidazol.

2. Preparar las siguientes diluciones del calibrador en tampón lmidazol.

Dilución del calibrador	01//40	01//30	01//20	1//10	1//5
Tampón lmidazol (mL)	3,9	2,9	1,9	0,9	0,4
COAGULATION	0,1	0,1	0,1	0,1	0,1
Factor	10//40	10//30	10//20	10//10	10//5
Concentración ( mg/dL)	0,25xc	0,33xc	0,5xc	1xc	2xc

3. A 0.2mL de cada dilución añadir 20uL de R3 y atemperar a 37ºC durante 4- min.

4. Añadir 0.1 mL de reactivo R1 y cronometrar la formación de coágulos. No atemperar la trombina R1.

VALORES DE REFERENCIA: 200-400 mg/dL
CURVA DE CALIBRACIÓN:                                
1/40: 64
1/30: 52.4
1/20: 29.4
1/10: 16.7
1/5: 10.1
MUESTRA: 24.9