PRÁCTICA 5 : OBSERVACIÓN AL MICROSCOPIO DE CÁMARA DE RECUENTO

FUNDAMENTO

El objetivo de esta práctica es manejar las cámaras de recuento. Aprender a enfocarla con facilidad, y una vez conseguido, desplazarse por ellas con habilidad.

CÁMARA DE NEUBAEUR.

La placa base en vidrio óptico especial tiene el tamaño de un portaobjetos. Las ranuras fresadas en la superficie de la placa base la dividen en dos zonas anchas exteriores y 3 campos pequeños interiores. A diferencia de las zonas exteriores, que se utilizan para rotulación, los campos interiores están esmerilados y pulidos. En el campo central (= fondo cámara) están grabadas dos cuadrículas de recuento separadas una de otra por una ranura. El fondo de la cámara del campo central es usualmente 0,1 mm más bajo (= profundidad cámara) que ambos campos adyacentes. Entre campo central y cubreobjetos ya colocado existe por tanto una ranura de 0,1 mm. La limitación lateral del volumen a contar se forma mediante las superficies imaginadas por la proyección vertical sobre las líneas exteriores de la cuadrícula de recuento.

MATERIAL

- Microscopio
- Cámara de recuento de NEUBAUER
- Cubrecámaras
- Papel milimetrado o cuadriculado.

TÉCNICA

1.) Enfocar con el microscopio el retículo de la cámara de recuento y dibujar en el papel milimetrado el retículo de la cámara.
- Primero con el objetivo de pequeño aumento 4X.
- Luego con el de mediano aumento 10X.
- Después con el objetivo de gran aumento 40X.

2.) Con objetivo de 40X enfoca los cuadros señalados.

3.) Enfocar, con el objetivo de 10X, uno de los cuadrados grandes situados en las cuatro esquinas del retículo.

- Contar el número de cuadrados medianos contenidos en ese cuadrado grande periférico: 16 cuadrados.
- Teniendo en cuenta que la longitud de cada uno de los lados del retículo es de 3mm, calcular:

        - La longitud de los lados de cada cuadrado grande periférico: 1 mm.

        - La longitud de los lados de cada uno de los cuadrados medianos englobados en un cuadrado               periférico: 0.25 mm.

4.) Teniendo en cuenta que la longitud del espacio comprendido entre el retículo y el cubre es de 0.1mm, calcular el volumen de sangre diluida que hay en la cámara de recuento montada, a nivel de :

- El retículo entero:

volumen= 3 x 3 x 0.1 = 0.9 mm3.

- Un cuadrado grande periférico: v= 1 x 1 x 0.1; v = 0.1mm3.

- Un cuadrado mediano incluido en un cuadrado grande periférico: 0.1 x 0.1 x 0.1; v = 0.001mm3

5.) Enfocar, con el objetivo de 10X, el cuadrado grande central.

- Contar el número de cuadrados medianos: 25 cuadros medianos.

- Contar el número de cuadrados pequeños englobados en uno de esos cuadrados medianos: 16 cuadrados pequeños.

6.) Tenindo en cuenta que la longitud de cada uno de los lados del retículo es de 3 mm, calcular:

- La longitud de los lados del cuadrado central: longitud = lado x lado; lado = 1 x 1 = 1 mm2.

- La longitud de los lados de cada uno de los cuadrados medianos incluidos en el cuadrado grande central: longitud =  0.2 x 0.2; longitud = 0.04 mm2.

7.) Teniendo en cuenta que la longitud del espacio comprendido entre el retículo y el cubre es de 0.1mm, calcular el volumen de sangre diluida que hay en la cámara de recuento montada, a nivel de : 

- El cuadro grande central: v= 1 x 1 x 0.1; v = 0.1 mm3.

- Un cuadro mediano englobado en el cuadrado grande central: v = 0.2 x 0.2 x 0.1; v = 0.004 mm3.

- Un cuadrado pequeño incluido en uno de esos cuadrados medianos: v = 0.05 x 0.05 x 0.1;

 v = 0.00025 mm3.