LDH ( Determinación cuantitativa de lactato deshidrogenasa ( LDH)

FUNDAMENTO

La lactato deshidrogenasa (LDH) cataliza la reducción del piruvato por el NADH, según la siguiente reacción:
Piruvato + NADH + H+ = L-lactato + NAD+

La velocidad de disminución de la concentración de NADH en el medio determinado fotométricamente, es proporcional a la concentración catalítica de LDH en la muestra ensayada.


SIGNIFICADO CLÍNICO

 La lactato deshidrogenasa es una enzima, distribuída por todo el organismo humano.
Las mayores concentraciones de LDH se encuentran en el hígado, corazón, riñón, músculo esquelético y eritrocitos.

El nivel de LDH en suero esta elevado en pacientes con enfermedades del hígado, infartos de miocardio, alteraciones renales, distrofias musculares y anemias.

El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.

REACTIVOS


R1: Tampón ( Imidazol, piruvato).
R2: Substrato ( NADH).

MATERIALES

- Cubetas
- Puntas de pipeta
- Tubos de ensayo
- Baño termostático








PROCEDIMIENTO

1.  Ajustar espectrofotómetro :
- Longitud de onda 340 nm.
- Temperatura 25 º C / 30ºC / 37 ºC
2. Ajustar el espectofotómetro a cero frente a agua destilada o aire.

Preparar previamente RT ( poner una pastilla dentro del bote que contiene el tampón).

3. Pipetear :
- 25º-30ºC : 3 mL de RT y 100 uL de muestra.
37ºC: 3mL de RT y 50 uL de muestra.

4. Mezclar, incubar 1 minuto.
5. Leer absorbancia ( A) inicial de la muestra, poner en marcha el cronómetro y leer la absorbancia cada minuto durante 3 minutos.

6. Calcular el promedio del incremento de absorbancia por minuto ( incremento A /min).


CÁLCULOS

25º- 30ºC incremento A / min x 4925 = U/L LDH
37ºC  incremento A / min x 9690= U/L LDH

1 medida : 2.167
2 medida : 2.163
3 medida: 2.150
4 medida : 2.145

CÁLCULOS MANUALES:

2.167-2.163= 0.004
2.163-2.150= 0.013
2.150-2.145= 0.005


( 0.022/3) x 9690 = 71.06 U/L

CÁLCULOS AUTOMÁTICOS:

71.06 U/L .