UREA-B : Determinación cuantitativa de urea IVD

PRINCIPIO DEL MÉTODO

La ureasa cataliza la hidrólisis de la urea , presente en la muestra, en amoniaco ( NH4-) y anhídrico carbónico ( CO2).

Los iones amonio reaccionan con salicílico e hipoclorito (ClONa), en presencia del catalizador nitroprusiato, para formar un indofenol verde.

La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de urea en la muestra ensayada.

SIGNIFICADO CLÍNICO 

La urea es el resultado final del metabolismo de las proteínas; se forma en el hígado a partir de la destrucción.

Puede aparecer la urea elevada en sangre ( uremia) en dietas con exceso de proteínas, enfermedades renales, insuficiencia cardíaca, hemorragias gástricas, hipovolemia y obstrucciones renales.

MATERIALES Y REACTIVOS

- R1 : Tampón ( Tampón fosfatos pH 6.7, EDTA, salicilato sódico y nitroprusiato sódico.
- R2: ClONa ( Hipoclorito sódico ( ClNa) , hidróxido sódico.
- R3: Enzimas ( ureasa ).
- UREA CAL ( patrón primario acuoso de urea 50 mg/dL.
- Gradilla, tubos de ensayo, pipetas, puntas de pipeta, baño termostático.

PROCEDIMIENTO

1. Ajustar espectrofotómetro ( logitud de onda 580 nm, temperatura 37ºC/ 15-25 ºC.

2. Ajustar espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.
3. Pipetear en una cubeta:
Blanco: RT (1mL)
Patrón: RT ( 1mL) , patrón ( 10uL).
Muestra: RT ( 1mL), muestra ( 10uL).

Previamente reconstituímos el patrón.

4. Mezclar e incubar 5 min a 37ºC o 10 min a temperatura ambiente.

5. Pipetear:
- Blanco: 1mL de R2.
- Patrón: 1mL de R2.
- Muestra 1mL de R2.

6. Mezclar e incubar a 5 min, a 37ºC o 10 min, a temperatura ambiente.

7. Leer la absorbancia (A) del patrón y la muestra, frente al blanco de reactivo. El color es estable como mínimo 30 min a 15-25ºC.

CÁLCULOS
(A) MUESTRA - (A) BLANCO / ( A) PATRÓN - (A) BLANCO  X  50 ( CONCENTRACIÓN PATRÓN = mg/ dL de urea en la muestra.

RESULTADOS :

ABSORBANCIA MUESTRA : 0.361A
ABSORBANCIA PATRÓN: 0.249 A

(0.361-0/0.249-0 ) x 50 = 72.48 mg/dL.