domingo, 14 de diciembre de 2014

PRÁCTICA 13: TITULACIÓN DE SUEROS ANTI-A, ANTI-B

CONCEPTO DE TÍTULO Y POTENCIA: 

TÍTULO: Concentración de un anticuerpo específico para un antígeno en particular. Se calcula determinando cuantas diluciones seriadas del suero se pueden realizar antes de que se deje de observar reacción Ag-Ac ( aglutinación).

POTENCIA: Mide la fuerza en la que e antisuero es capaz de reaccionar con los Ags respectivos. Se determina apartir del resultado de las siguientes aglutinaciones en la titulación, se anota la lectura por grado de aglutinación de 0 a 4+. Asignando a cada uno de estos un valor numérico.


4+: Total en un solo cúmulo grande
3+: Grandes aglomeraciones con pocos eritrocitos.
2+: Gran cantidad de conglomerados pequeños con número moderado de eritrocito.
1+: Conglomerados definidos pero finos ( cúmulos de 20 eritrocitos o menos )
+/- : Eritrocitos que pueden contener ocasionalmente algún conglomerado pequeño.
-: Los eritrocitos se mueven libremente. No hay conglomerados visibles.



MATERIAL Y REACTIVOS

- Suero Anti-A, Suero Anti-B, Suero Anti-AB
- Hematíes comerciales A1, B ( Suspensión Hematíes al 2%)
- Suero salino fisiológico
 ( NaCl 0.85 %)
- Centrífuga. Baño termostático
- Microscopio, transluminador
- Tubos de hemólisis
- Pipetas automáticas




TÉCNICA

1. Colocar en una gradilla una serie de 11 tubos de ensayo por cada suero a probar.
2. Marcar los tubos como p, 2,4,8,16,32,64,128,256,512,1024...





3. Agregar a cada uno d ellos excepto al primero 0. ml de solución salina o solución salina tamponada 
(PBS).




4. Agregar 0.1 ml del suero a probar al tubo p y al tubo 2 únicamente.
5. Mezclar perfectamente el contenido del tubo 2 y transferir 0.1 ml de esa solución al tubo siguiente, repetir este procedimiento hasta el último tubo.
6. Desechar 0.1ml del último tubo.
7. Agregar 0.1ml de Suspensión de hematíes a todos los tubos.
8. Mezclar y centrifugar 25 segundos a 3500 rpm.



9. Leer y anotar los resultados.






RESULTADOS:

DILUCIÓN  POTENCIA

1:1                  +4

1:2                  +4

1:4                  +3

1:8                  +3

1:16                +3

1:32                +2

1: 64               +1

1:128              +/-

1:256              +/-

1:512               -

1:1024             -

SUERO UTILIZADO: Suero con antígenos A.
FECHA DE CADUCIDAD: 27/10/2014
TÍTULO: 1:512




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