PRÁCTICA 8: RECUENTO MANUAL HEMATÍES

FUNDAMENTO

Se basan en la dilución de la sangre total capilar o anticoagulada con EDTA, en líquido de Hayem, con una pipeta de dilución y el recuento de las células mediante hemocitómetro o cámara de recuento utilizando un microscopio óptico. Para calcular el valor total de recuento tendremos en cuenta la dilución utilizada, el área contada y la altura de la cámara utilizada.
El líquido de Hayem contiene cloruro sódico para que sean isotónicos y evitar hemólisis, e incorpora citrato sódico como anticoagulante y un antiséptico como la formalina.

MATERIAL Y REACTIVOS

- Microscopio
- Pipetas de 20 ul o pipetas de Thoma
- Cámara de Neubauer
- Sangre anticoagulada
- Papel de filtro
- Líquido diluyente de Hayem

TÉCNICA

1.Preparar un tubo con 3.98 ml de líquido de Hayem.

2. Con una micropipeta de 20 ul, pipeteamos la sangre, limpiamos la sangre adherida en la parte exterior de la punta con una gasa sin arrastrar sangre del interior y la ponemos en el tubo de ensayo con el diluyente. En la parte superior del tubo se lava varias veces con diluyente el interior de la punta de pipeta para arrastrar bien la sangre.
3. Tapar el tubo de ensayo con papel de parafina y se mezcla suavemente por inversión.
4. Montar la cámara.
5. Llenar la cámara por capilaridad. ( Tener cuidado de llenarla lo suficiente para que ocupe toda su superficie).
6. Dejar que repose durante 3 min en cámara húmeda, para que sedimenten los  hematíes. 
7. Con el objetivo de 10x enfocamos, con el 20x se observa la distribución de las  células ( si no están uniformemente distribuídos debemos repetir la técnica) y el recuento lo hacemos con el de 40x.
8. Contaremos 5 cuadros, del los 25 situados en el medio de la cámara que se divide cada uno en 16 cuadros. Contaremos los 4 de las esquinas y el central.

9. Contar solo aquellos hematíes situados sobre la línea superior y derecha.

10. Calcular la cifra de hematíes de la muestra ( expresado en eritrocitos por mm3 de sangre) teniendo en cuenta la dilución realizada y el volumen de los cuadros contados.

Nº de hematíes contados en los cinco cuadros x 10.000


RESULTADOS 

Cuadrado superior izquierdo: 53
Cuadrado superior derecho: 41
Cuadrado inferior izquierdo: 44
Cuadrado inferior derecho: 37
Cuadrado central: 54

229 x 10000 = 2.290.000