El título de antiestreptolisinas ASLO es la medición de
anticuerpos anti-Estreptococo betahemolíticos del tipo A
. Esta bacteria produce una enzima llamada estreptolisina O
, que puede destruir los hematíes y el cuerpo reacciona
contra ella produciendo anticuerpos específicos
antiestreptolisina O.
. Esta bacteria produce una enzima llamada estreptolisina O
, que puede destruir los hematíes y el cuerpo reacciona
contra ella produciendo anticuerpos específicos
antiestreptolisina O.
La medición de estos anticuerpos es lo que refleja el análisis
de antiestreptolisinas O ó ASLO.
Para qué se realiza la pruebade antiestreptolisinas O ó ASLO.
La presencia de títulos altos de antiestreptolisinas O ó
ASLO, indican una infección por la bacteria Estreptococo
betahemolíticos del tipo A, que puede producir una
glomerulonefritis, una fiebre reumática, una endocarditis
bacteriana o una escarlatina.
ASLO, indican una infección por la bacteria Estreptococo
betahemolíticos del tipo A, que puede producir una
glomerulonefritis, una fiebre reumática, una endocarditis
bacteriana o una escarlatina.
La elevación de ASLO aparece a la semana de la infección
por el estreptococo, los valores más elevados se dan en la
tercera semana de la infección y es cuando pueden
aparecer las enfermedades secundarias a esta infección
(glomerulonefritis, una fiebre reumática, una endocarditis
bacteriana o una escarlatina) pero no son específicos de
ninguna de ellas. Deben ser diagnosticadas cada una de
ellas por la clínica o por otros estudios diagnósticos.
por el estreptococo, los valores más elevados se dan en la
tercera semana de la infección y es cuando pueden
aparecer las enfermedades secundarias a esta infección
(glomerulonefritis, una fiebre reumática, una endocarditis
bacteriana o una escarlatina) pero no son específicos de
ninguna de ellas. Deben ser diagnosticadas cada una de
ellas por la clínica o por otros estudios diagnósticos.
El ASLO pueden mantenerse elevado a los 6 meses en el
30% de los casos.
Procedimiento de obtención30% de los casos.
Para realizar este análisis NO se precisa estar en ayunas.
Los niveles de ASLO pueden ser enmascarados por los
antibióticos y por los corticoides. También un aumento de la
betalipoproteína puede inhibir la estreptolisina O y producir
títulos falsos de elevación de ASLO.
antibióticos y por los corticoides. También un aumento de la
betalipoproteína puede inhibir la estreptolisina O y producir
títulos falsos de elevación de ASLO.
| Niveles normales de antiestreptolisinas O (ASLO) | |
| en adultos | Menores de 160 Unidades/ml |
| en niños menores de 2 años | Menores de 50 Unidades/ml |
| en niños entre 2 y 4 años | Menores de 160 Unidades/ml |
| en niños entre 4 y 12 años | Entre 160 y 300 Unidades/ml |
MATERIAL:
- Hematíes 3%.
- Placas microtiter V.
- Micropipetas.
- Puntas de pipeta.
- Gradillas.
- Suero humano.
- Solución tampón fosfato..
- Papel parafilm.
- Horno cultivo.
- Tampón 6.5 pH.
- Tampón 6.5 pH.
Procedimiento
1.Lavar 3 veces eritrocitos humanos grupo O con PBS (también puede utilizarse eritrocitos de conejo). Resuspender 0,5 ml de eritrocitos empacados en un tubo con 9,5 ml del amortiguador1 , para obtener una suspensión aproximadamente al 5%.
2.Obtener una muestra de suero e inactivarlo a 56°C por 30 min. El suero puede conservarse hasta 1 día en refrigeración. Correr una alícuota de un suero control con cada grupo de muestras.
3.Preparar las diluciones del suero.
4.Reconstituir la toxina reducida y liofilizada apenas antes de usarla, con el amortiguador, de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
5.Para cada muestra, preparar una serie de tubos según el siguiente cuadro:
6.Mezclar suavemente e incubar a 37°C por 15 min para que ocurra la neutralización (si hay anticuerpos en la muestra).
7.Agregar 0,5 ml de la suspensión de eritrocitos a cada tubo, mezclar suavemente e incubar a 37°C por 45 min, resuspendiendo cada 15 min.
8.Centrifugar los tubos por 5 min a 800 xg y observar cuál es el último tubo (máxima dilución) en el cual no hay ningún grado de hemólisis. Este se toma como punto final de la prueba, la cual se puede expresar como título, o como unidades Todd (tienen el mismo valor numérico).
Observaciones adicionales
El tubo control de eritrocitos (control negativo) debe tener un sobrenadante completamente claro y el tubo control de la toxina (control positivo) debe quedar lisado, para que la prueba sea técnicamente válida. Además, la muestra control debe resultar dentro de los límites del valor esperado. Se considera una seroconversión significativa cuando el aumento del título es de más de 2 diluciones, aún en títulos bajos. Los títulos elevados (>250 U Todd) o las seroconversiones significativas, sugieren una infección reciente. En algunas enfermedades hepáticas, el aumento de ciertas β-lipoproteínas que inhiben la toxina puede causar resultados falsamente positivos. En pacientes con trastornos hepáticos se debe verificar los resultados con otras pruebas serológicas para la detección de anticuerpos antiestreptocóccicos.
En resumen:
1. Reconstituímos el suero y la estreptolisina con agua destilada.
Control+ reactivos : suero del paciente, hematíes 3% + Tampón y SLO ( toxina)
2. Diluímos 200 uL de suero + 1800uL de tampón ( 1/10)
Dilución 100uL suero + 2400uL tampón ( 1/25).
3. Echamos tampón en la placa microtiter.
4. Dispensamos suero 1/10 en la fila A ( haciéndo una dilución seriada), y no echar en el pocillo nº 12
5. Volvemos a hacer lo mismo con suero ( 1:25) en la fila B, y tampoco echar en el pocillo nº 12.
6. Depositamos 25 uL de disolución de estreptolisina en todos los pocillos menos en el 12 de la fila B.
7. Agitar e incubar durante 15 minutos/37ºC.
8. Depositar 25uL de suspensión de hematíes (B).
9. A continuación dispensar 25 uL de hematíes en todos los pozos.
10. Agitar suavemente e incubar 45min/37ºC, agitándo después de los primeros 15 minutos.
RESULTADO
TÍTULO A: 9
TÍTULO B: 8
La información es buena, pero no se verá absolutamente nada hasta que se le cambie el subrayado negro, o resalten las letras de color blanco
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