PRÁCTICA7: RECUENTO MANUAL DE LEUCOCITOS

FUNDAMENTO:

Consiste en hacer el recuento en una dilución de sangre entera anticoagulada, Es un método poco usado debido al elevado error que presenta, La técnica consiste en diluir sangre anticoagulada con EDTA, en líquido de Turck, con una pipeta de dilución y el recuento de las células medinte hemocitómetro o cámara de recuento utilizando un microscopio óptico. Para calcular el valor total de recuento tendremos en cuenta la dilución utilizada, el áre contada y la altura de la cámara utilizada.

MATERIAL Y REACTIVOS

- Microscopio
- Pipetas de 20 ul o pipetas de Thoma
- Cámara de Neubauer
- Sangre anticoagulada
- Papel de filtro
- Líquido de Turck. La composición del líquido de Turck es la siguiente:
* 2 ml de ácido acético glacial
* 1 ml de solución acuosa de violeta genciana al 1 %
* 100 ml de agua destilada

El ácido acético provoca la lisis de los hematíes sin que se alteren los leucocitos. El violeta de genciana tiñe ligeramente de azul el núcleo de los leucocitos mejorando la observación.

PROCEDIMIENTO

1. Preparar un tubo con 0.38 ml de líquido de Turck ( = 380 uL)
2. Con una micropipeta de 20 ul, pipetemos la sangre, limpiamos la sangre adherida en la parte exterior de la punta con una gasa de papel de filtro sin arrastrar sangre del interior y la ponemos en el tubo de ensayo con el diluyente, En la parte superior del tubo se lava varias veces con diluyente en el interior de la punta de pipeta para arrastra bien la sangre.
3. Tapar el tubo de ensayo con papel de parafina y se mezcla suavemente.
4. Montar la cámara.
5. Llenar la cámara por capilaridad. ( Debe llenarse de forma que el líquido ocupe toda su superficie).
6. Dejar que repose durante 5', para que sedimenten los leucocitos.
7. Con el objetivo de 10x enfocamos , con el de 20x se observa la distribución de las células .
8. Enfocar con 40x. Contar los leucocitos presentes en 16 cuadros , de los 4 cuadros grandes situados en las esquinas de la cámara.
9. No contar partículas extrañas ni pequeñas burbujas. Para realizar un recuento correcto y no contar leucocitos por segunda vez, si existen células sobre los bordes exteriores de un cuadrado, se cuentan solo aquellos situados sobre las líneas superior y derecha y no se cuentan los que están situados en las líneas inferior e izquierda.
10. Calcular la cifra de leucocitos de la muestra ( expresado en leucocitos por mm3 de sangre) teniendo en cuenta la dilución realizada y el volumen de los cuadros.

RESULTADOS


Volumen contado: 0.5 mm3
Dilución utilizada: 1:20
Leucocitos contados: 79
Leucocitos mm3: 79 x 50 = 3950