La PCR-Látex es una técnica de aglutinación en porta para la detección cualitativa y semicuantitativa de PCR en suero humano. Las partículas de látex recubiertas con anticuerpos anti-PCR humana son aglutinadas por moléculas de PCR presentes en la muestra del paciente.
SIGNIFICADO CLINICO
La Proteína C-reactiva es una proteína de fase aguda, presente en el
suero de pacientes sanos, la cual puede incrementarse
significativamente en la mayoría de procesos infecciosos bacterianos y virales, tejidos dañados, inflamación y neoplasias malignas. El incremento de concentración de esta proteína se produce después de unas horas de desarrollarse la inflamación pudiendo alcanzar niveles de 300 mg/L en 12-24 horas.
REACTIVOS
Látex Suspensión de partículas de látex cubiertas de IgG de
cabra anti-PCR humana, pH, 8,2. Azida sódica 0,95 g/L.
Control + Tapón rojo
Suero humano con una concentración de PCR > 20
mg/L. Azida sódica 0,95 g/L.
Control - Tapón azul Suero animal. Azida sódica 0,95 g/L.
PRECAUCIONES
Todos los componentes de origen humano han resultado ser negativos para el antígeno HBs, HCV y para el anti-HIV (1/2). Sin embargo, deben tratarse con precaución como potencialmente infecciosos.
CALIBRACION
La sensibilidad del reactivo de látex está estandarizada frente el Material de Referencia CRM 470/RPPHS.
CONSERVACION Y ESTABILIDAD
Todos los componentes del kit están listos para el uso, y son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del vial, cuando se mantienen los viales bien cerrados a 2-8ºC, y se evita la contaminación durante su uso. No congelar: la congelación de los reactivos altera irreversiblemente la funcionalidad de éstos.
Indicadores de deterioro de los reactivos: Presencia de partículas y
turbidez.
MATERIAL ADICIONAL- Agitador mecánico rotatorio de velocidad regulable a 80-100 r.p.m.
MUESTRAS
Suero fresco. Estable 8 días a 2-8ºC o 3 meses a -20ºC.
Las muestras con restos de fibrina deben ser centrifugadas antes de la prueba.
No utilizar muestras altamente hemolizadas o lipémicas.
PROCEDIMIENTO
Método cualitativo
1. Atemperar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente. La sensibilidad del ensayo disminuye a temperaturas bajas.
2. Depositar 50 µL de la muestra (Nota 1) a ensayar y una gota de
cada uno de los controles Positivo y Negativo, sobre círculos
distintos de un porta.
3. Homogeneizar suavemente el reactivo de PCR- látex antes de
usar. Depositar una gota (50 µL) junto a cada una de las gotas
anteriores.
4. Mezclar las gotas con un palillo, procurando extender la mezcla por toda la superficie interior del círculo. Emplear palillos distintos para cada muestra.
5. Situar el porta sobre un agitador rotatorio a 80 – 100 r.p.m. y agitar durante 2 minutos. El exceso de tiempo puede originar la aparición de falsos positivos.
Método semicuantitativo
1. Realizar diluciones dobles de la muestra en solución salina 9 g/L.
2. Proceder para cada dilución, como en la prueba cualitativa.
LECTURA E INTERPRETACION
Examinar macroscópicamente la presencia o ausencia de aglutinación inmediatamente después de retirar el porta del agitador. La presencia de aglutinación indica una concentración de PCR igual o superior a 6 mg/L (Nota 2 y 3).
En el método semicuantitativo, se define el título como la dilución
mayor que da resultado positivo.
CALCULOS
La concentración aproximada de PCR en la muestra del paciente se
obtiene aplicando la siguiente fórmula:
6 x Título de PCR = mg/L
CONTROL DE CALIDAD
Se recomienda utilizar el control positivo y negativo para controlar la funcionalidad del reactivo de látex, así como modelo de comparación para la interpretación de los resultados.
VALORES DE REFERENCIA
Hasta 6 mg/L. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus
propios valores de referencia.
CARACTERISTICAS DEL METODO
1. Sensibilidad analítica: 6 (5-10) mg/L, en las condiciones descritas en el ensayo.
2. Efecto prozona: No se observa efecto prozona hasta valores de
1600 mg/L.(Nota 1).
3. Sensibilidad diagnóstica: 95,6 %.
4. Especificidad diagnóstica: 96,2%.
INTERFERENCIAS
Bilirrubina (20 mg/dL), hemoglobina (10 g/L) y los lípidos (10 g/L) no interfieren. Factores reumatoides (100 UI/mL), interfieren. Otras
sustancias pueden interferir.
.
NOTAS
1. Una concentración muy elevada de PCR en la muestra del
paciente puede dar lugar a un resultado falsamente negativo
debido al efecto prozona. Se recomienda re-ensayar la muestra
utilizando un volumen de 20 µL.
2. La intensidad de la aglutinación no es indicativa de la
concentración de PCR en las muestras ensayadas.
3. El diagnóstico clínico no debe realizarse únicamente con los
resultados de un único ensayo, sino que debe considerarse al
mismo tiempo los datos clínicos del paciente.
En resumen, nuestro objetivo es determinar la existencia de PCR en suero humano.
El suero utilizado está liofilizado por lo que se reconstituye con agua destilada ( 1 mL).
El reactivo utilizado ( látex) es el que lleva adherido el anticuerpo.
RESULTADOS:
En la primera tarjeta: Aglutinación en el test y control + y
sin aglutinación en el control -
En la segunda tarjeta: Aglutinación en 1:2 y 1:4 y sin
aglutinación 1:8, 1:16, 1:32; 1:64
Por lo tanto, el titulo es 1:4.
Concentración aproximada de PCR = 6 X 4 = 24 mg/ L
.
Por turbidimetria la concentración de PCR = 49 mg/ L.
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