Permite detectar las anomalías cualitativa y cualitativamente.
La hemoglobina presenta una carga global positiva o negativa que resulta de la suma de las cargas de los aminoácidos que constituyen la proteína.
Pequeños cambios en la cadena de la globina modifican la carga y en consecuencia la migración que permite detectar las anomalías.
MATERIALES
- Fuente de alimentación- Cubeta de electroforesis
- Aplicador
- Tiras de acetato de celulosa.
- Cloroformo para la preparación del hemolizado
- Suero fisiológico
- Tampón
- Colorante rojo ponceau
- Decolorante rojo ponceau
- Solución transparentadora
PREPARACIÓN DEL HEMOLIZADO
Se recoge 1 mL sangre con anticoagulante.Se centrifuga a 3000 r.p.m durante 5 min.
Se elimina el plasma con ayuda de una pipeta pasteur.
Se hace una nueva suspensión de los hematíes con 4-5 mL de suero fisiológico 3 veces
Se hemolizan los hematíes en un tubo de vidrio:
-1 vol. de hematíes
- 1.5 vol. de agua destilada
- 0.5 vol. de cloroformo
Agitar fuertemente. Centrifugar 20 min a 3000 r.p.m. El sobrenadante se emplea para la electroforesis una vez efectuada la dilución adecuada. Para ello se valora la hemoglobina y de acuerdo con el resultado se prepara una solución de Hb 5 g/100 mL diluyendo con agua destilada.
PROCEDIMIENTO
1. Sumergir las tiras en tampón duarante 10 min. como mínimo.
2. Absorber el exceso de tampón de las tiras entre dos hojas de papel de filtro.
3. Constatar que sea la cara absorvente de las tiras mediante la esquina cortada, ésta debe quedar orientada hacia el operador, hacia la derecha y abajo.
4. Montar las tiras sobre el puente .
5. Migraciones:
Semi- micro electroforesis: 90 min a 200 volts. Efectuar la aplicación a 1.5 cm del borde catódico.
6. Fin de la migración. Desconectar el alimentador y las cubetas.
7. Es muy importante ponerla en contacto con la superficie de tinción durante 10 min.
8. Decoloración: 3-4 lavados.
9. Transparentador: 2-3 min.
Para rojo ponceau disolver en ácido acético. y lectura a 520.
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