ELISA

FUNDAMENTO

Tanto anticuerpos y antígenos pueden ser cuantificados cuantitativa y cualitativamente utilizando un
soporte para realizar todo este proceso.

MATERIALES
 
- Tiras de 8 pocillos con el primer anticuerpo fijado.
- Anticuerpo anti. proteína bovina marcado con peroxidasa
- Sustrato/ cromógeno
- Solución stop
- Solución de dilución del conjugado
- Micropipeta
- Frasco lavador
- Espectofotómetro












PROCEDIMIENTO

A partir de la muestra positiva, preparar tres muestras problema.
- Una dilución 1/50, mezclar 20uL de la muestra madre con 980 uL de agua destilada.
- Una dilución 1/20, mezclar 50uL de la muestra madre con 950 uL de agua destilada
- Una dilución 1/100, mezclar 10 uL de la muestra madre con 990 uL de gua destilada.

Preparación de los patrones:
Diluir los patrones 1/100 con agua destilada.
Preparación de la solución de conjugado :
Preparar solo el volumen de solución necesario para el ensayo.

PROCEDIMIENTO

1. Sacar de la bolsa la placa con las tiras que van a seer utilizadas. Guardar en la bolsa el resto de tiras. Atemperar todos los reactivos, patrones, muestras y tiras que van a ser utilizados en el ensayo.
2. Aplicar en cada pocillo de la placa 50 microL  de muestra o patrón diluído e incubar a temperatura ambiente durante 30min.
3. Eliminar el líquido de los pocillos volcando a placa sobre un recipiente.
4. Lavar cada pocillo con 0.3ml de agua destilada (*3)
5. Aplicar en cada pocillo 50 microL de solución de conjugado. Incubar a temperatura ambiente durante 30min.
6. Repetir 3 veces la secuencia de lavados como en los pasos 3 y 4.
7. Aplicar en cada pocillo 50 microL de la solución de sustrato y dejar desarrollar el color azul a 30 min a temperatura ambiente.
8 Añadir en cada pocillo 50 microL de la solución stop para parar la reacción. Mezclar dando unos golpes suaves en el borde lateral del marco.
9. Leer la absorbancia de cada pocillo a una longitud de onda de 450 nm.