HEMOGLOBINA A2

FUNDAMENTO

Después de prepara un hemolizado, las hemoglobinas son retenidas por una resina de intercambio aniónico. La Hb A2 se eluye de forma específica bajo estrictas condiciones de pH y fuerca iónica, cunatificándose por lectura espectrofotométrica a 415 nm.

MATERIALES

Reactivo
Microcolumnas
Sangre
Pipeta automática
Parafilm
Gradilla
Agua destilada

PROCEDIMIENTO

1. Pipetear en un tubo de ensayo :
Sangre 50uL y agua destilada 200uL.
 Separación y lectura de la Hb A2.
2. Destapar la parte superior de la microcolumna, romper a continuación la lengüeta inferior y bajar el disco superior hasta el nivel de la resina, evitando comprimirla, con la ayuda del extremo plano de una pipeta. Dejar gotear hasta que el líquido alcance el nivel del disco, desechando el eluido.

3. Aplicar cuidadosamente sobre el disco superior: hemolizado 50uL.
4.Cuando haya penetrado todo el hemolizado añadir, procurando arrastrar los posibles restos del mismo:
- reactivo 1: 200 uL y desechar el eluído
5. Colocar la microcolumna sobre un tubo de ensayo y añadir:
reactivo 1: 3mL y recoger el eluído.
6. Agitar bien y leer la absorbancia (A) de la fracción HbA2 a 415 nm frente a agua destilada . La absorbancia es estable al menos durante seis horas.
Lectura de la hemoglobina total.
7. Pipetear en un tubo de ensayo:
Agua destilada 12mL y 50 uL de hemolizado.
8. Agitar bien y leer la absorbancia (A) a 415nm frente a agua destilada ( Ahb total).
La absorbancia es estable al menos durante seis horas.


/CÁLCULOS:
AHbA2/AHbtotal*25= % HbA2

ABSORBANCIAS Hb total :
0.920
0.934
0.925
0.787
0.299

ABSORBANCIAS Hb A2:
0.078
0.079
0.072
0.087
0.047