Una placa de gel se corta para formar una serie de agujeros en el gel. Un extracto de la muestra de interés se coloca en un pocillo, y sueros o anticuerpos purificados se colocan en otro pocillo y la placa a la izquierda durante 48 horas en desarrollarse. Durante este tiempo los antígenos en el extracto de la muestra y los anticuerpos cada difundan fuera de sus respectivos pozos. Cuando los dos frentes de difusión se encuentran, si cualquiera de los anticuerpos reconocen cualquiera de los antígenos, que se unirán a los antígenos y formar un complejo inmune. El complejo inmune precipitados en el gel para dar una delgada línea blanca, que es una firma visual de reconocimiento del antígeno.
El método puede llevarse a cabo en paralelo con múltiples pozos llenos de diferentes mezclas de antígeno y múltiples pozos con diferentes anticuerpos o mezclas de anticuerpos, y la reactividad de antígeno-anticuerpo se puede ver mediante la observación de que entre los pozos se observó el precipitado. Cuando más de uno se utiliza bien hay muchos posibles resultados basados en la reactividad del antígeno y anticuerpo seleccionado. La zona de las líneas de equivalencia puede dar una plena identidad, identidad parcial, o una no-identidad.
MATERIALES
- Placas
- Gel de agarosa
- Patrón
PROCEDIMIENTO
Preparación de agar:
Tras preparar el medio de agarosa, dejar enfriar.
1. Hacer agujeros con punta de pipeta.
2.Preparar tubos A,B,CyD
3. Prepara tubo con líquido morado para hacer la prueba.
- Luego, llenamos los tubos ependorf con las distintas muestras (A,B,C,D) en el cual:
- Tubo A: Antisuero (Anticuerpo)
- Tubo B : Suero completo (Ag)
- Tubo C : Albumina (Ag)
También llenamos en un tubo Ependorf para el ensayo de la placa de petri con 13 agujeros. Después de hacer el ensayo cogemos la plantilla y hacemos los agujeros a la placa de petri. Al finalizar, en las restantes placas echamos:
- En la primera: A y B
- En la segunda: A,B y C
- En la tercera A,C y D
- Por ultimo, esperamos unos 30 minutos a temperatura ambiente. Luego lo tapamos con parafilm y lo metemos en la estufa y a las 24 horas comprobamos el resultado. El resultado debería de dar:
- Placa 1 : identidad completa
- Placa 2 : identidad parcial media
- Placa 3 : no identidad
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