HEMOGLOBINA. DRABKIN. COLORIMETRICO

FUNDAMENTO

La hemoglobina es oxidada por la acción del ferricianuro a metahemoglobina y mediante el cianuro se convierte en cianmetahemoglobina.
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de hemoglobina presente en la muestra ensayada.

REACTIVOS

Hemoglobin: Ferricianuro de potasio - 0.60 mmol/L
Cianuro de potasio 77 mmol/L
Dihidrógeno fosfato de potasio 2 mmol/L

OPCIONAL

Hemoglobin CAL: Patrón de hemoglobina 15g/dL
Origen animal.

PREPARACIÓN REACTIVO DE TRABAJO ( RT) :
 Para 5 mL   4.9 mL agua destilada + 2 gotas de Reactivo.
Para 250 mL agua destilada + 1 frasco ( 5mL) de reactivo.

MATERIAL ADICIONAL
- Espectrofotómetro o analizador para lecturas de 540 nm.
- Cubetas de 1.0 cm  de paso de luz.
- Equipamiento habitual de laboratorio.

MUESTRAS

Sangre capilar o venosa.
Usar anticoagulante como EDTA, heparina u oxalato.
Estabilidad de la muestra : 1 semana a 2-8ºC.

PROCEDIMIENTO

1. A justa longitud de onda del espectrofotómetro 540nm.
Y  también ajustar temperatura 15-25ºC.
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.
3. Pipetear:
 Método macro.

Blanco: 5.0 mL de RT
Patrón: 5.0 mL de RT y  20 uL de calibrador.
Muestra: 5.0 RT y 20 uL muestra.

CÁLCULOS:

A MUESTRA/A PATRÓN X 15= g/ dL de hemoglobina en la muestra.

VALORES DE REFERENCIA:

Hombres; 14-18 g/dL
Mujeres: 12-16 g/dL

RESULTADOS:

Blanco: 0.000A
Patrón; 0.440A
Muestra: 0.222A

0.222/0.440x 15 = 7.56 g/dL hemoglobina en la muetra.