BILIRRUBINA DIRECTA

PRINCIPIO DEL MÉTODO

La bilirrubina se convierte en azobilirrubina mediante el ácido sulfanílico diazotado midiéndose fotometricamente. De las dos fracciones presentes en suero bilirrubin-glucurónido y bilirrubina libre ligada a la albúmina, solo la primera reacciona en medio acuoso ( bilirrubina directa) precisando la segunda solubilización con dimetilsulfóxido para que reaccione ( bilirrubina indirecta). En la determinación de la bilirrubina indirecta se determina también la directa, correspondiente el resultado a la bilirrubina total.

La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de bilirrubina presente en la muestra ensayada. 

SIGNIFICADO CLÍNICO

La bilirrubina se origina por la degradación de la hemoglobina.

Es transportada del bazo al hígado y se excreta en la bilis.

La hiperbilirrubinemia es el resultado de un incremento de la bilirrubina en plasma. Causas más probables de la hiperbilirrubinemia:
- Bilirrubina total: aumento de la hemólisis, alteraciones genéticas, anemia neonatal, alteraciones eritropoyéticas, presencia de drogas.
- Bilirrubina directa: colestasis hepática, alteraciones genéticas y alteraciones hepáticas.

MATERIALES


- Cubetas
- Puntas de pipeta
- Gradilla
- Pipeta automática
- Gradilla para cubetas
- Reactivo 1 ( Ácido sulfanílico y ácido clorhídrico)
- Reactivo 2 ( Sodio nitrito)
- Suero
- Tubos de ensayo
- Espectrofotómetro
- Agua destilada

PROCEDIMIENTO

1)  Ajustar espectrofotómetro:
Longitud de onda: 555 nm
Temperatura: 15-25 ºC
2) Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.
3) Pipetear en una cubeta:
Blanco: 1.5 mL R1 + 100 uL de muestra/calibrador
Bilirrubina directa: 1.5 mL R1 + 50 uL R2 + 100 uL de muestra/calibrador

4) Mezclar e incubar exactamente 5 min a 15-25 ºC.
5) Leer la absorbancia.

RESULTADOS:

A = 0.085 nm
Bilirrubina directa = 0.085-0 x 14 = 1.19 mg/dL

Sensibilidad analítica: 1mg/dL
Bilirrubina directa : hasta 0.25mg/dL