GOT ( AST) NADH, Cinético UV. IFCC rec.

Determinación cuantitativa de aspartato aminotransferasa GOT ( AST)

PRINCIPIO DEL MÉTODO

La aspartato aminotransferasa ( AST ) inicialmente llamada transaminasa glutamato oxaloacética ( GOT) cataliza la transferencia reversible de un grupo amino del aspartato al alfa-cetoglutarato con formación de glutamato y oxalacetato. El oxalacetato producido es reducido a malato en presencia de malato deshidrogenasa ( MDH) y NADH:

La velocidad de disminución de la concentración de NADH en el medio, determina fotometricamente, es proporcional  a la concentración catalítica de AST en la muestra ensayada.

SIGNIFICADO CLINICO

 La AST es una enzima intracelular, se encuentra en niveles altos en el músculo del corazón, las células del hígado, las células del músculo esquelético y en menor cantidad en otros tejidos.
Aunque un nivel elevado de AST en suero no es específico de enfermedad hepática se emplea principalmente para su diagnóstico y seguimiento, junto con otras enzimas como la ALT y ALP. También se utiliza en el control post-infarto, en pacientes con desordenes del músculo esquelético, y en otras afecciones.

MATERIALES
 - Tubos de ensayo
- Pipetas
- Puntas de pipeta
- Gradilla
- Cubetas
- Gradilla de cubetas
- R1 Tampón: TRIS pH 7.8
- R2 ( NADH, LDH,MDH y alfa-cetoglutarato): Substrato
- Espectrofotómetro
- Suero

PROCEDIMIENTO

1)  Para obtener RT disolver un comprimido de R2 en un vial de R1.
2) Tapar y mezclar hasta disolver su contenido
3) Ajustar las condiciones del ensayo en el espectofotómetro:
- Longitud de onda: 340 nm.
- Temperatura constante: 25ºC/30ºC/37ºC
4) Ajustar el espectofotómetro frente a agua destilada o aire.
5) Pipetear en una cubeta:
RT: 1mL
Muestra: 100 uL

6) Mezclar e incubar 1 minuto.
7) Leer la absorbancia incial de la muestra, poner en marcha el cronómetro y leer la absorbancia cada minuto durante 3 minutos.

8) Calcular el promedio del incremento de absorbancia por minuto.

RESULTADOS

1ª absorbancia= 1.671 nm
2ª absorbancia = 1.674 nm
3ª absorbancia = 1.669 nm
4 ª absorbancia = 1.657 nm

Velocidad de reacción = 11.66 UI/L.

CÁLCULOS (Concentración ):

11.66 UI/L x 1750 = 20405 U/L