BILIRRUBINA TOTAL ( DMSO. COLORIMÉTRICO)

PRINCIPIO DEL MÉTODO

La bilirrubina se convierte en azobilirrubina mediante el ácido sulfanílico diazotado midiéndose fotométricamente. De las dos fracciones presentes en suero bilirrubin-glucurónico y bilirrubina  libre ligada a la albúmina, solo la primer reacciona en medio acuoso ( bilirrubina directa) precisando la segunda la solubilización con dimetilsulfóxido ( DMSO) para que reaccione ( bilirrubina indirecta). En la determinación de la bilirrubina indirecta se determina también la directa correspondiente el resutado a la bilirrubina total.


SIGNIFICADO CLÍNICO

 La bilirrubina se origina la degradación de la hemoglobina.
Es transportada del bazo al hígado y se excreta en la bilis.
La hiperbilirrubinemia es el resultado de un incremento de la bilirrubina en plasma. Causas más probables de la hiperbilirrubinemia:

- Bilirrubina total: aumento de la hemólisis, alteraciones genéticas, anemia neonatal, alteraciones eritropoyéticas, presencia de drogas.
- Bilirrubina directa: colestasis hepática, alteraciones genéticas y alteraciones hepáticas.




MATERIALES

- Tubos de ensayo
- Pipeta
- Puntas de pipeta
- Gradilla
- Cubetas
- Gradilla de cubetas
- R1 ( Ácido sulfanílico, ácido clorhídrico y dimetilsulfóxido)
- R2 ( Sodio nitrito)
- Suero
- Espectrofotómetro




















PROCEDIMIENTO

1) Condiciones de ensayo:
- Longitud de onda : 555 nm
- Temperatura: 15-25 ºC
2) Ajustar espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.
3) Pipetear en una cubeta:
- Blanco: 1.5 mL ( R1) + 100 uL ( muestra/calibrador)
- Bilirrubina total: 1.5 mL ( R1) + 50 uL ( R2) + 100 uL ( muestra/calibrador)

4) Mezclar e incuar exactamente 5 minutos a 15-25 ºC.
5) Leer la absorbancia.

RESULTADOS
Absorbancia: 0.105 nm

Bilirrubina total: absorbancia muestra - absorbancia blanco muestra x factor ( 22) = mg/dL bilirrubina en la muestra; 0.105 - 0 x 22 = 2.3mg/ dL bilirrubina total.
Bilirrubina libre : absorbancia bilirrubina total - absorbancia bilirrubina directa; 2.3 mg/ dL - 1.19 mg/ dL = 1.11 mg/dL.

Valores de referencia según el protocolo : hasta 1.10 mg/ dL.

Sensibilidad analítica : 1 mg / dL.