MATERIALES
- Probeta o tubo de ensayo
- Papel indicador de pH.
- Portaobjetos y cubreobjetos
- Pipetas Pasteur
- Varilla de vidrio
- Cámara de Neubauer
- Baño termostático
- Microscopio
- Estufa
- Cámara húmeda
- Eosina azulada ( eosina Y) al 1% en agua destilada.
- Nigrosina al 10 % en agua destilada o SSF ( puede añadírsele, por cada 100 mL de colorante final, 0.4 mL de glicerina al 75%.
- Formol al 40 %
- Bicarbonato sódico.
- Colorante panóptico rápido o Giemsa.
- Metanol
- Sperm-Mar test.
1.- EXAMEN FÍSICO:
- Licuación: por observación, manteniendo la muestra en el baño a 37ºC.
- Volumen: en una probeta graduada o tubo de ensayo graduado, ambos precalentados a 37ºC.
- Color: por observación.
- Viscosidad: con pipeta Pasteur, viéndo como gotea la muestra.
- Filancia: con ayuda de la varilla de vidrio.
- pH : con tiras de papel indicador, dejando caer una gota sobre ellas, esperando unos segundos y leyendo el color en compraración con la carta de colores del envase.
2. EXAMEN MICROSCÓPICO
- Vitalidad:
1) Mezclar 50 uL semen + 50 uL de eosina azulada al 1 %.
2) Esperar de 20-30 segundos y añadir 100 uL de nigrosina al 10 % ( con/sin glicerina al 75%).
3) Agitar y realizar una extensión sobre portaobjetos.
4) Tras el secado de la preparación, observar al microscopio con el objetivo de inmersión de x100.
- Recuento:
1) Diluimos el semen al 1/21 en la solución de Macomber-Saunders (5g de bicarbonato sódico, 1 mL de formol al 40% y agua destilada hasta 100 mL); para lograr la dilución, ponemos 50 μL de semen con 1 mL de solución.
2) Montamos y cargamos la cámara de Neubauer y, tras 2 minutos de reposo en cámara húmeda, la ponemos al microscopio y contamos los 16 cuadraditos de una de las esquinas.
Resultado:
82 x 10 x 10.000 = 8.200.000 espermatozoides/mL
Morfología:
1) Realizamos una extensión sobre portaobjetos con una gota de semen y dejamos que se que perfectamente.
2) Posteriormente fijamos con metanol y teñimos con panóptico rápido.
3)Tras secar, pasmos la preparación al microscopio y observamos.
Resultado:
Espermatozoides normales : 70%
Espermatozoides anormales: 30%
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