UREA-B : Determinación cuantitativa de urea IVD

PRINCIPIO DEL MÉTODO

La ureasa cataliza la hidrólisis de la urea , presente en la muestra, en amoniaco ( NH4-) y anhídrico carbónico ( CO2).

Los iones amonio reaccionan con salicílico e hipoclorito (ClONa), en presencia del catalizador nitroprusiato, para formar un indofenol verde.

La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de urea en la muestra ensayada.

SIGNIFICADO CLÍNICO 

La urea es el resultado final del metabolismo de las proteínas; se forma en el hígado a partir de la destrucción.

Puede aparecer la urea elevada en sangre ( uremia) en dietas con exceso de proteínas, enfermedades renales, insuficiencia cardíaca, hemorragias gástricas, hipovolemia y obstrucciones renales.

MATERIALES Y REACTIVOS

- R1 : Tampón ( Tampón fosfatos pH 6.7, EDTA, salicilato sódico y nitroprusiato sódico.
- R2: ClONa ( Hipoclorito sódico ( ClNa) , hidróxido sódico.
- R3: Enzimas ( ureasa ).
- UREA CAL ( patrón primario acuoso de urea 50 mg/dL.
- Gradilla, tubos de ensayo, pipetas, puntas de pipeta, baño termostático.

PROCEDIMIENTO

1. Ajustar espectrofotómetro ( logitud de onda 580 nm, temperatura 37ºC/ 15-25 ºC.

2. Ajustar espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.
3. Pipetear en una cubeta:
Blanco: RT (1mL)
Patrón: RT ( 1mL) , patrón ( 10uL).
Muestra: RT ( 1mL), muestra ( 10uL).

Previamente reconstituímos el patrón.

4. Mezclar e incubar 5 min a 37ºC o 10 min a temperatura ambiente.

5. Pipetear:
- Blanco: 1mL de R2.
- Patrón: 1mL de R2.
- Muestra 1mL de R2.

6. Mezclar e incubar a 5 min, a 37ºC o 10 min, a temperatura ambiente.

7. Leer la absorbancia (A) del patrón y la muestra, frente al blanco de reactivo. El color es estable como mínimo 30 min a 15-25ºC.

CÁLCULOS
(A) MUESTRA - (A) BLANCO / ( A) PATRÓN - (A) BLANCO  X  50 ( CONCENTRACIÓN PATRÓN = mg/ dL de urea en la muestra.

RESULTADOS :

ABSORBANCIA MUESTRA : 0.361A
ABSORBANCIA PATRÓN: 0.249 A

(0.361-0/0.249-0 ) x 50 = 72.48 mg/dL.

MEDICIÓN DE LA GLUCOSA

MATERIALES 

- Lanceta

- Alcohol

- Tiras reactivas 

- Tiras de glucómetro.

- Aparato lector de tira

- Orina 

- Sangre capilar

Determinaciones, glucemia y glucosuria.

1. Nos pinchamos en el dedo pero antesponemos el chip del glucómetro.

2. Tocamos la pantalla pero que salga del vástago.

3. Introducimos la tira en el bote de orina de manera que todos los cuadros queden sumergidos.

4. Depositamos la tira en papel para limpiar de manera lateral , para quitar excesos.

5. Depositamos la tir en el vástago y esperamos unos segundos y leemos el resultado.

RESULTADO:

145 mg/dL.

ESPECTRO DE ABSORCIÓN

En esta práctica buscamos la longitud de onda adecuada para una sustancia determinada. Lo haremos con una solución de azul de metileno en un tubo de ensayo ( muy diluida).

1. Encendemos el espectrofotómetro y el ordenador, y lo programamos según nos indica el protocolo.

Llenamos la cubeta y la colocamos en el espectrofotómetro. Pinchamos start y nos ira apareciéndo una curva en una ventana llamada spectral amalysisi la cual maximizaremos para ver correctamente.

2. Después seguiremos el protocolo y tras ajustarlo obtendremos los valores de los picos más altos  de la gráfica los cuales son indicativos de la longitud de onda a la cual la sustancia introducida tiene mayor absorbancia.

2º LDC LABORATORIO DE DIAGNÓSTICO CLÍNICO: BIOQUÍMICA

PRÁCTICA1:
CURVA DE CALIBRACIÓN Y MANEJO DEL ESPECTROFOTÓMETRO.

MATERIALES:

-Cromógeno 1: concentración= 800mg/dL
-Cromógeno 2: concentración= 600mg/dL
-5 tubos de ensayo para realizar  las diluciones del cromógeno1
-4 tubos de ensayo para el cromógeno 2
- Pipeta automática graduable
- Espectrofotómetro.
- Gradilla
- Cubetas
- Solución madre previamente preparada con la concentració antes mencionada.

PROCEDIMIENTO

1. Hacer la bateria de diluciones de cada cromógeno.
- DILUCIÓN 1/2 : 4 mL
- DILUCIÓN 1/3: 3 mL.

2. Medir absorbancia del cromógeno azul a 590 nm y el cromógeno rosa a 500 nm.

VALORES:

Matraz 1 : AZUL

1/1; 0.454 A . Concentración :800 mg/dL
1/2: 0.213 A. Concentración: 400 mg/dL
1/4 : 0.083 A . Concentración: 200mg/dL
1/8: 0.048 A. Concentración 100 mg/dL
1/16: 0.026 A. Concentración 50 mg/dL


Matraz 2 : ROSA

1/1: 0.073 A. Concentración 600 mg/dL.
1/3: 0.011 A . Concentración: 200 mg/dL
1/9: 0.001 A . Concentración: 66.67 mg/dL.
1/27: - 0.011 ( Este valor no lo tenemos en cuenta a la hora de hacer la curva debido a que es un error). Concentración : 22.22 mg/dL.

PROBLEMA:
 ROSA: 0.060 A Concentración: 150 mg/dL.
AZUL: 0.105 A Concentración 300 mg/

ABSORBANCIA RESULTANTE:

662 nm
Tras esto realizaremos de nuevo la curva de calibración y añadiremos la muestra problema e interpretaremos. Nuestra mesa se encargó de hacer la bateria de dilución con el cromógeno azul.

VISITA A TORRECARDENAS ( aparatos que se emplean para conservación y realización de las pruebas diagnósticas

CONTADOR HEMATOLÓGICO

Aquí os dejo un vídeo de mis compañeros de clase de TSLDC explicando muy bien las partes que  componen un contador hematológico y su consiguiente funcionamiento.

DETERMINACIÓN EN TARJETA

FUNDAMENTO

Determinar los anticuerpos presentes.





MATERIALES

- Tarjeta 
- Suspensión de hematíes.
- Reactivo Liss.
- Hematíes control.





PROCEDIMIENTO

- Echar 50  uL de la solución resultante al mezclar  1 mL de solución de Liss y 10 uL de hematíes.

- En el último tubo añadir 50 uL de hematíes control.
- Centrifugamos durante 10 min en la centrifuga de tarjetas.  
 

RESULTADO FINAL